细胞培养

细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织（动物）。培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。

细胞培养实验步骤

1、完全培养基配置：培养基的配制（需在超净台内无菌操作）：10%FBS+90% 基础培养基，根据细胞培养需求选择相应的基础培养基。

2、细胞复苏：

（1）把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。冻存液融至黄豆粒大小，拿出来喷酒精放到超净工作台里。

（2）把上述细胞悬液吸到装5ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

（3）把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞重悬。吸到装有10ml培养基的培养器皿中前后左右轻轻摇动，使培养瓶中的细胞均匀分布。

（4）标好细胞种类和日期等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

（5）3天换一次培养基。

3、细胞传代：

（1）培养瓶中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

（2）把原有培养基吸掉，用PBS洗一遍后加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞），消化1-5分钟。

（3）细胞都变圆后吸出胰酶加入培养基终止消化。

（4）吹打细胞，使细胞都悬浮。

（5）根据细胞种类把细胞传到几个培养瓶中。一般，癌细胞1传4，正常细胞1传3。继续培养。

4、细胞冻存：把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮罐中保存。

冻存液的配制： 90%FBS+10%DMSO.

注：DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。