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细胞培养

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细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长,在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中,由于环境的改变,细胞的移动或受一些其他因素的影响,培养时间加长,传代导致细胞出现单一化型。

细胞培养实验步骤

1完全培养基配置培养基的配制(需在超净台内无菌操作):10%FBS+90% 基础培养基,根据细胞培养需求选择相应的基础培养基

2细胞复苏

1把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。冻存液融至黄豆粒大小,拿出来喷酒精放到超净工作台里。

2把上述细胞悬液吸到装5ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。

3把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞重悬。吸到装有10ml培养基的培养器皿中前后左右轻轻摇动,使培养中的细胞均匀分布。

4标好细胞种类和日期等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。

53天换一次培养基。

3细胞传代

1培养中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

2把原有培养基吸掉,用PBS洗一遍后加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞),消化1-5分钟。

3细胞都变圆后吸出胰酶加入培养基终止消化。

4吹打细胞,使细胞都悬浮。

5根据细胞种类把细胞传到几个培养中。一般,癌细胞14,正常细胞13。继续培养。

4细胞冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃ 30min-20℃ 30min-80℃过夜,然后放到液氮中保存。

冻存液的配制: 90%FBS+10%DMSO.

注:DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。




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