PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)

产品简介

PEI MAX——高产工业化转染试剂-高度浓缩，可制备大量转染试剂

Polysciences转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于工业化生产。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。PEI可用作转染试剂，它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。

PEI MAX 40K是由Polysciences出品的全合成线性聚乙烯亚胺瞬时转染试剂。PEI MAX是一款高度浓缩的粉剂，大量科学家选择PEI MAX ，在内部自行制备低成本高效益的PEI转染试剂。多年以来，经过众多业内人士评审的公开研究和出版文献表明，在HEK293、CHO 和 Sf9系统中可获得很高的转染效率，在重组抗体和病毒载体生产中稳定性高，可靠性强。PEI MAX 提供从96孔板到200L生物反应器持续的高基因表达细胞体系，实现从新药研发到工业化生产的轻松过度。而且与大多数细胞转染方案相比，使用PEI MAX 至少可降低40%转染成本（部分案例可降低90%转染成本）。

产品特点

PEI MAX 40K是线性聚乙烯亚胺盐酸盐形式（Linear Polyethylenimine Hydrochloride），是线性化聚乙烯亚胺PEI 25K的升级产品。相比于PEI 25K，PEI MAX 40K ：

1.完全水解（去乙酰化）；

2.盐酸盐形式，具更高的水溶特性；

3.含更长连续性乙烯亚胺片段，其质子化氮水平比PEI 25K提高11%以上。

应用领域

PEI MAX40K（cat#24765）是一款非GMP等级的PEI转染试剂，适用于基础学术研究和药物研发早期阶段，以固体粉末形式提供，需用户自行配置（详情见使用方法）。

客户体验

Expression of mAb B72-3, 8 days post-transfection using Gibco Freestyle F17 cell culture media . For more information, see the following publication: Delafosse, L., Xu, P. & Durocher, Y. Comparative study of  polyethylenimines for transient gene expression in mammalian HEK293 and CHO cells. Journal of Biotechnology 227,103–111 (2016). 

PEI MAX粉末配置方法：

1)将1g PEI MAX 40K放入盛有900 mL水的玻璃烧杯中；

2)放入搅拌转子，放置于磁力搅拌器上，设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡；

3)等待PEI MAX 40K完全溶解，通常需要5分钟左右；

4)用25 mL塑料移液管加入1 N氢氧化钠滴定至pH 6.9~7.1；

5)如果不小心超过7.1，则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1；

6)将溶液转移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；

7)用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液；

8)按需分装，4°C储存（切记不可冷冻）；

注：未经配制的粉末有效期为2年。

配置成液体后分装在合适的瓶子中，并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能。

如仅用于蛋白定性研究，分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。

经过驯化的无血清培养悬浮细胞转染流程

1.准备工作

 转染前 2~3 小时，种植细胞密度为 1X10⁶ /mL 于培养容器中。

2. 转染步骤（以 250mL 摇瓶为例，转染前种植细胞总体积为 25mL，最终总培养体积为 50mL）

准备 PEI-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。

1)在含有2.5mL（25mL的10%）稀释液的聚丙烯EP管中加入 50ug 质粒 DNA（质粒用量建议在 1~2ug/10⁶ 细胞之间优化，此处使用 2ug/10⁶ 细胞）；

2) 轻轻地混匀/振荡溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 50~200uL PEI 转染试剂（PEI/DNA 的比例建议在 1~4：1之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1）；

4) 涡旋振荡 5 秒钟；

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 PEI-DNA 复合物形成（共孵育时间建议不超过 20 分钟）；

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次；

注：边晃动摇瓶，边将 PEI-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 PEI-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

3. 孵育培养

将细胞培养瓶放入培养箱，摇瓶培养 2~3 小时后，加入25mL新鲜培养基，继续培养。

通常，在转染后36-48小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒。转染后72-96小时可观察到最大产量。

含血清培养的贴壁细胞转染流程

1. 准备工作

• 转染前18~24小时细胞铺板。

• 在培养基中加入合适数量的细胞，以确保在转染前形成 60~80%汇合度的单细胞层，此为最理想的细胞转染密度。

2. 转染步骤（以 6 孔板单孔举例）

• 转染前 1~2 小时，将需要转染的孔中的培养基替换成 3mL 新鲜的含有2%低血清或无血清的培养基。（高浓度血清抑制PEI的性能，大多数情况下，较低的血清含量(≤ 5%)或无血清将获得较高的转染效率）。

• 准备 PEI-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。

1) 在含有300uL（3mL的10%）稀释液的聚丙烯 EP 管中加入2ug质粒 DNA；

2) 轻轻地混匀/振荡溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 2~8 uL PEI 转染试剂（PEI-DNA 的比例建议在 1~4：1 之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1）；

4) 涡旋振荡 5 秒钟；

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 PEI-DNA 复合物形成（建议共孵育时间不超过 20 分钟）；

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次

• 边晃动细胞培养板，边将 PEI-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 PEI-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

3. 孵育培养

  • 将细胞培养板放入培养箱培养 18~24（请注意，此处并非常规lipo脂质体转染的 4 小时后换液）小时后，更换含有血清的正常培养基；

  • 通常，在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒，转染后 72-96 小时可观察到最大产量。